上篇给大家讲过《 常见细胞基培养有哪些种类 》，细胞培养基是细胞不可缺少的部分。今天围绕细胞培养，小蔚给结合自己多年的经验给大家讲讲细胞培养的步骤。让各位科研小伙伴在实验室也能顺利实验。

细胞培养的步骤

第一步：需要将超净台及所用仪器耗材进行紫外线灭菌，时间为 30 分钟。然后金沙打开水浴锅预热至 37 度。将培养基放入 37 度的培养箱或水浴锅预热。

第二步：从夜氮罐中取出冻存细胞，然后将冻存细胞放置 -80 度的冰箱等 5-10 分钟。将细胞至于冰箱让管内液氮蒸发后再进行水浴可以避免水浴过程中发生安全事故。

第三步：用 37 度水浴快速融化细胞，待冻存细胞融化至仅有米粒大小冰块时停止水浴，融化时间通常在 1 分钟左右。这里建议将冻存的细胞装在透明的 PE 手套中进行水浴，这样可以有效避免水浴带来的污染。

第四步：将冻存管在 150g 条件下离心 1-2min ，注意参数约为 90-1000rpm ，不同离心机可能有差异，需提前设置好。

第五步：打开超净台取出预热好的培养基，然后用酒精喷洒消毒后放入超静台内，随后在培养瓶内加 10 毫升培养基。

第六步：离心完成后取出冻存的细胞，用酒精擦拭消毒后小心开启冻存管，弃上清，取细胞沉淀重悬后接种至培养瓶内，注意重悬吹打细胞力度不要过大，用十字法或八字法混匀细胞。

第七步：镜检确认细胞均匀分布在培养基后将细胞放置培养箱培养。

细胞培养注意事项

1、细胞培养要遵循安全标准以在实验室中保护自己。需要个人防护装备（实验室外套、实验室手套、安全眼镜）。特别是，在处理液氮时，请务必遵守各实验室制定的规定，例如使用特殊的绝缘手套、全脸面罩、防溅围裙和手套。另外，为了防止头发污染，最好将长发扎起来或戴上帽子。

为避免空气传播细菌，请将正常实验和组织培养的实验服和鞋分开，并避免污染培养室环境。通过穿着不同颜色的夹克或实验室外套更容易区分它们。

2、实验环境的准备。始终保持超净工作台、工作台以及其他处理细胞的区域周围区域的清洁。避免将纸板等包装物放置在进行细胞培养的区域。请务必定期检查和清洁培养箱、超净工作台、离心机、显微镜等，保持清洁。定期使用 SigmaClean® 清洁水浴。

所有使用的材料，如试剂、烧瓶和培养基，都应贴上标签或标明日期和内容，以明确里面的内容。另外，使用前请务必检查所用培养基和试剂的质量。每天检查培养基是否有细菌或真菌污染的迹象。即使您购买了市售的培养基，也请务必进行此项检查。

所有与细胞直接接触的培养箱、培养设备、培养基等必须无菌，防止微生物污染。因此，所有使用过的物品都必须进行灭菌或消毒。

一般用于消毒的酒精有效浓度为乙醇 70% 左右，异丙醇 60-70% 左右，通过脱水凝固进行消毒。乙醇对大多数病毒有效（不适用于没有外壳的病毒），异丙醇对病毒无效。

灭菌主要有三种：高压灭菌、干热灭菌和过滤灭菌。

3、在实际操作过程中，还有一些需要注意的地方。尝试一次仅使用一种类型的细胞系。这降低了交叉污染和错误标签的风险。此外，如果超净工作台中发生细菌或支原体的气溶胶传播，受影响的瓶子和烧瓶也会减少。

在操作之间使用合适的消毒剂（例如 70% 乙醇）对工作表面进行消毒，并在处理不同细胞系之间等待至少 15 分钟。培养过程中，每个细胞系的培养基瓶尽可能远离。应定期检测细胞是否有支原体感染。

上述为大家介绍细胞培养过程步骤及注意事项，希望上述文章对大家有所帮助。如果您对细胞培养过程还有疑问，可以和金沙沟通。上海金沙可以产品有细胞，如果想了解了解 细胞系 ，欢迎前来咨询。