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深入了解PCR检测试剂盒:组成与原理的解析

现如今,遗传学帮我金沙越来越多的了解周围世界,通过遗传学技术解开进化史,更精确诊断和治疗疾病。为了完成这些工作,金沙需要发现并检测DNA序列,然而,金沙用来执行操作基本工具之一称为“PCR”或“ 聚合酶链式反应 ”。今天,上海金沙给大家介绍一下 PCR检测试剂盒作用原理及组成


PCR检测试剂盒原理

PCR检测试剂盒组成


DNA模版。DNA模版,DAN模版可以包含人类血液样品、食物样品、水样品以及棉签上收集的细菌等等。

引物(primers)。金沙要扩增DNA区域,金沙需使用称为DNA片段来实现这一点。引物的类型分为正向和反向两种,正向引物将匹配金沙想要扩增的区域开头的一条DNA链上的序列,反向序列引物将匹配另一条链上区域的末端。引物在PCR反应起上引导DNA聚合酶合成新的DNA链的作用。

酶(enzymes)。在PCR检测中最主要的酶是热稳定的DNA聚合酶,DNA聚合酶可以找到引物与DNA模版特异性结合区域的末端,并在适当的条件下催化DNA合成。最常用的是来自热液微生物生物体的热稳定DNA聚合酶,如Taq DNA聚合酶。

缓冲液(buffer):PCR检测试剂中的缓冲液用于维持PCR最佳的反应条。它主要作用是控制PH值、离子浓度和稳定酶的活性。

核苷酸(nucleotides)。核苷酸是PCR试剂中DNA合成的原料。包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞苷酸(dCTP)和脱氧胸苷酸(dTTP)。供给PCR反应中的DNA聚合酶在合成新链时使用。


PCR检测试剂盒组成

PCR检测试剂盒作用原理


根据PCR技术的工作原理设计,在进行PCR反应时,主要分为三个步骤:

第一步,变性。模版DNA经过加热至93°左右,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,为下一步退火做准备。

第二步,退火。模版DNA变性成单链之后,使温度至55度左右,模板DNA单链能够与引物的互补序列配对结合。

第三步,延伸。DNA模版引物在72度下,DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸,可构成DNA)为反应原料,靶序列为模板,按照碱基互补配对原则和半保留复制原理,就能合成一条新的与模板DNA链互补的复制链。

上述为大家总结了PCR检测试剂盒的组成和作用原理,希望上述文章对大家有所帮助。在操作实验过程可以配合说明书及实验过程的注意事项。